抗体処方物

专利摘要:
本発明は、抗ＣＤ２０ヒトモノクローナル抗体処方物、その調製のための方法および使用に関する。
公开号:JP2011506538A
申请号:JP2010538594
申请日:2008-12-11
公开日:2011-03-03
发明作者:アドラー，ミヒャエル；ウルト，クリスティーヌ；マーラー，ハンス−クリスティアン
申请人:エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ；
IPC主号:A61K39-395

专利说明:

[0001] 本発明は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体処方物、前記処方物の調製のための方法および処方物の使用に関する。]
[0002] 発明の背景
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原またはＢｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢおよび成熟Ｂリンパ球上に位置する約３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287；およびEinfield et al. (1988)EMBO J. 7(3):711-717）。ＣＤ２０は末梢血またはリンパ器官由来のＢ細胞の９０％超の表面上に見出され、そして初期プレＢ細胞発生の間に発現され、そして形質細胞分化まで残存する。ＣＤ２０は正常Ｂ細胞および悪性Ｂ細胞の両方の上に存在する。特に、ＣＤ２０は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）のＢ細胞の９０％超の上で発現されているが（Anderson et al. (1984) Blood 63(6): 1424-1433)）、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常形質細胞、または他の正常組織上には見出されない（Tedder et al. (1985) J, Immunol. 135(2):973- 979）。]
[0003] ＣＤ２０タンパク質の８５アミノ酸カルボキシ末端領域は細胞質内に位置する。この領域の長さは、それぞれ３、３、２８、１５、および１６アミノ酸の相対的に短い細胞質内領域を有するＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＧ重鎖または組織適合性抗原クラスＩＩａまたはβ鎖のような他のＢ細胞特異的表面構造のものとは対照的である（Komaromy et al. (1983) NAR 11:6775-6785）。最後の６１個のカルボキシ末端アミノ酸のうち、２１個は酸性残基であり、一方、２個のみが塩基性であり、このことは、この領域が強い実効負電荷を有することを示す。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号はＮＰ−６９０６０５である。ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化および分化プロセスにおける初期段階の調節に関与し得（Tedder et al. (1986) Eur. J. Immunol. 25 16:881-887）、そしてカルシウムイオンチャネルとして機能し得ると考えられている（Tedder et al. (1990) J. Cell. Biochem. 14D: 195）。]
[0004] そのＣＤ２０結合様式および生物学的活性が有意に異なる２つの異なる型の抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S., et al, Blood, 103 (2004) 2738-2743；およびCragg, M.S., et al, Blood, 101 (2003) 1045-1051）。Ｉ型抗体（リツキシマブなど）は補体媒介性細胞傷害において強力であり、一方、ＩＩ型抗体（トシツモマブ（ベキサール（登録商標）、Ｂ１）、１１Ｂ８およびＡＴ８０など）は同時のホスファチジルセリン曝露とともにカスパーゼ非依存性アポトーシスを介する標的細胞死を効果的に開始する。]
[0005] Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の共有する共通の特徴を表１にまとめる。]
[0006] Ｉ型抗ＣＤ２０抗体ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体
Ｉ型ＣＤ２０エピトープＩＩ型ＣＤ２０エピトープ
ＣＤ２０を脂質ラフトに局在化させる ＣＤ２０を脂質ラフトに局在化させない
増加したＣＤＣ(IgG1イソタイプの場合) 減少したＣＤＣ(IgG1イソタイプの場合)
ＡＤＣＣ活性(IgG1イソタイプの場合) ＡＤＣＣ活性(IgG1イソタイプの場合)
完全な結合能低下した結合能
ホモタイプ凝集より強いホモタイプ凝集
架橋に際してのアポトーシス誘発 架橋なしでの強い細胞死誘発
表１：Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の特性]
[0007] 発明の概要
１つの局面において、本発明は、以下を含む医薬処方物に関する：
１〜１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ２０抗体；
１〜１００ｍＭのバッファー；
場合により、０．００１〜１％の界面活性剤；および
場合により、１〜８００ｍＭの等張剤；
ｐＨ４．５〜７．０の範囲。]
[0008] 好ましくは、前記抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗体である。より好ましくは、前記抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。]
[0009] 発明の詳細な説明
用語「抗体」は、本発明による特徴的特性が保持されている限り、限定するものではないが、抗体全体、ヒト抗体、ヒト化抗体および遺伝子操作抗体、例えばモノクローナル抗体、キメラ抗体または組換え抗体ならびにそのような抗体のフラグメントを含む抗体の種々の形態を包含する。]
[0010] 「抗体フラグメント」は、全長抗体の部分、一般に少なくともその抗原結合部分または可変領域を含む。抗体フラグメントの例は、ディアボディ（diabody）、単鎖抗体分子、イムノトキシン、および抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含む。さらに、抗体フラグメントは、ＣＤ２０抗原に結合する、ＶＨ鎖の、すなわち、ＶＬ鎖と一緒に機能的抗原結合ポケットにアセンブルすることができる、またはＶＬ鎖の、すなわち、ＶＨ鎖と一緒に機能的抗原結合ポケットにアセンブルすることができる、特徴を有する単鎖ポリペプチドを含む。]
[0011] 「抗体フラグメント」はまた、それ自体はエフェクター機能（ＡＤＣＣ／ＣＤＣ）を提供することはできないが、適切な抗体定常ドメインと組み合わされた後に本発明による方法でこの機能を提供するフラグメントを含む。]
[0012] 本明細書において使用する用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。従って、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。１つの実施態様において、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合された、ヒト重鎖トランスジーンおよびヒト軽鎖トランスジーンを含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物（例えば、トランスジェニックマウス）から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。]
[0013] 用語「キメラ抗体」は、組換えＤＮＡ技術によって通常調製される、１つの供給源または種由来の可変領域（すなわち、結合領域）および異なる供給源または種由来の定常領域の少なくとも一部を含むモノクローナル抗体を指す。マウス可変領域およびヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントおよびヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡフラグメントを含む発現された免疫グロブリン遺伝子の産物である。本発明によって包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラスまたはサブクラスがもとの抗体のものから改変または変化されているものである。そのような「キメラ」抗体は「クラススイッチ抗体」ともいわれる。キメラ抗体を産生するための方法は、当技術分野において現在周知の従来の組換えＤＮＡおよび遺伝子トランスフェクション技術を含む（例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；ＵＳ５，２０２，２３８およびＵＳ５，２０４，２４４参照）。]
[0014] 用語「ヒト化抗体」は、フレームワークまたは「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比較して異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変されている抗体を指す。好ましい実施態様において、「ヒト化」抗体を調製するために、マウスＣＤＲがヒト抗体のフレームワーク領域中に移植される。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327；およびNeuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270参照。特に好ましいＣＤＲは、キメラおよび二機能性抗体について上記した抗原を認識する配列を表すものに対応する。]
[0015] 本明細書において使用する用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は当技術分野の水準で周知である（van Dijk, M.A., and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374）。そのような技術に基づいて、非常に多様な標的に対するヒト抗体を産生することができる。ヒト抗体の例は、例えば、Kellermann, S. A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。]
[0016] 本明細書において使用する用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、作製または単離される全てのヒト抗体、例えば、ＮＳ０またはＣＨＯ細胞のような宿主細胞またはヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離される抗体、または宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現させられる抗体を含むことが意図される。そのような組換えヒト抗体は、再配列された形態のヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体は、インビボ体細胞超変異に供されている。従って、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来しそして関連するが、インビボにおけるヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しないかもしれない配列である。]
[0017] 本明細書において使用する「特異的結合」または「特異的に結合する」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体を指す。好ましくは、結合親和性は１０−９ｍｏｌ／ｌ以下（例えば、１０−１０ｍｏｌ／ｌ）のＫＤ値、好ましくは１０−１０ｍｏｌ／ｌ以下（例えば、１０−１２ｍｏｌ／ｌ）のＫＤ値のものである。結合親和性は、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））のような標準的な結合アッセイを用いて決定される。]
[0018] 本明細書において使用する用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は一本鎖または二本鎖であり得るが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。]
[0019] 「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合に直接的には関与しないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合、およびＣＤＣ）に関与する。]
[0020] 本明細書において使用する「可変領域」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗体の抗原への結合に直接的に関与する軽鎖および重鎖の対の各々を示す。可変ヒト軽および重鎖のドメインは同じ一般的構造を有し、そして各々のドメインは、３つの「超可変領域」（または相補性決定領域、ＣＤＲ）によって連結された、その配列が広範に保存されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はｂシート立体構造をとり、そしてＣＤＲはｂシート構造を連結するループを形成し得る。各々の鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によってその三次元構造に保持され、そして他の鎖由来のＣＤＲと一緒に抗原結合部位を形成する。抗体の重および軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明による抗体の結合特異性／親和性における特に重要な役割を果たし、それゆえ、本発明のさらなる目的を提供する。]
[0021] 本明細書において使用する場合、用語「超可変領域」または「抗体の抗原結合部分」は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」または「ＦＲ」領域は、本明細書において定義するような超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。それゆえ、抗体の軽鎖および重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲおよびＦＲ領域は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)の標準的定義および／または「超家変ループ」由来の残基に従って決定される。]
[0022] 用語「ＣＤ２０」および「ＣＤ２０抗原」は本明細書において互換的に使用され、そして、細胞によって天然に発現されるか、またはＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現されるヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォームおよび種ホモログを含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０を不活化することによって、ＣＤ２０を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機構の１つ以上によって生じ得る。]
[0023] 当技術分野において認識されているようなＣＤ２０の同義語は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、およびＬＦ５を含む。]
[0024] 本発明による用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗体のＣＤ２０抗原に対する結合特性および生物学的活性に依存して、２つの型の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）を、Cragg, M.S., et al , Blood 103 (2004) 2738-2743；およびCragg, M.S., et al Blood 101 (2003) 1045-1051に従って区別することができる（表２参照）。]
[0025] Ｉ型抗ＣＤ２０抗体ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体
Ｉ型ＣＤ２０エピトープＩＩ型ＣＤ２０エピトープ
ＣＤ２０を脂質ラフトに局在化させる ＣＤ２０を脂質ラフトに局在化させない
増加したＣＤＣ(IgG1イソタイプの場合) 減少したＣＤＣ(IgG1イソタイプの場合)
ＡＤＣＣ活性(IgG1イソタイプの場合) ＡＤＣＣ活性(IgG1イソタイプの場合)
完全な結合能低下した結合能
ホモタイプ凝集より強いホモタイプ凝集
架橋に際してのアポトーシス誘発 架橋なしでの強い細胞死誘発
表２：Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の特性]
[0026] Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の１つの重要な特性はその結合様式である。従って、Ｉ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体を、リツキシマブと比較した前記抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率によって分類することができる。]
[0027] 本明細書において使用する「抗ＣＤ２０抗体」は、Ｉ型またはＩＩ型のいずれかの抗体であることができる。好ましくは、それはＩＩ型抗体である。]
[0028] Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した前記抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率０．８〜１．２、好ましくは０．９〜１．１を有する。そのようなＩ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、リツキシマブ（ＷＯ９４／１１０２６）、１Ｆ５ＩｇＧ２ａ（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ；Press et al., Blood 69/2:584-591 (1987)）、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／１０３０８１に開示されるような）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７およびＷＯ２００５／１０３０８１に開示されるような）および２Ｈ７ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０５６３１２に開示されるような）を含む。好ましくは、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した前記抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率０．３〜０．６、好ましくは０．３５〜０．５５、より好ましくは０．４〜０．５を有する。そのようなＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えば、トシツモマブ（Ｂ１ ＩｇＧ２ａ）、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／０４４８５９に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７に開示されるような）、およびＡＴ８０ ＩｇＧ１を含む。好ましくは、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（ＷＯ２００５／０４４８５９に開示されるような）と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。]
[0029] 「リツキシマブと比較した抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率」は、実施例２に記載のような、Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）を用いるＦＡＣＳＡｒｒａｙ（Becton Dickinson）におけるＣｙ５とコンジュゲートした前記抗ＣＤ２０抗体およびＣｙ５とコンジュゲートしたリツキシマブを使用する直接免疫蛍光測定（平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定する）によって決定され、そして以下のように算出される：]
[0030] Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率＝]
[0031] ＭＦＩは、平均蛍光強度である。本明細書において使用する「Ｃｙ５標識比率」は、抗体分子当たりのＣｙ５標識分子数を意味する。]
[0032] 典型的には、前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した前記第１の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率０．８〜１．２、好ましくは０．９〜１．１を有する。]
[0033] 典型的には、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した前記第２の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比率０．３〜０．６、好ましくは０．３５〜０．５５、より好ましくは０．４〜０．５を有する。]
[0034] 好ましい実施態様において、前記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。]
[0035] 「増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する抗体」によって、その用語が本明細書において定義されるように、当業者に公知の任意の適切な方法によって決定した場合に増加したＡＤＣＣを有する抗体が意味される。１つの受け入れられているインビトロＡＤＣＣアッセイは以下のとおりである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）アッセイは、エフェクター細胞として、ランダムに選択された健常ドナーの血液から単離された、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）アッセイを以下のプロトコルに従って行う：
ｉ）ＰＢＭＣを、標準的密度遠心分離手順を使用して単離し、そしてＲＰＭＩ細胞培養培地中に５×１０６細胞／ｍｌで懸濁する；
ｉｉ）標的細胞を、標準的組織培養方法によって増殖させ、９０％より高い生存率で指数増殖期から回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄し、１００μＣｉの’’ＣＩ−で標識し、細胞培養培地で２回洗浄し、そして細胞培養培地中に１０’細胞／ｍｌの密度で再懸濁する；
ｉｉｉ）１００μｌの上記最終標的細胞懸濁物を９６ウェルマイクロタイタープレートの各々のウェルに移す；
ｉｖ）抗体を４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌまで細胞培養培地中で段階希釈し、そして得られた抗体溶液の５０μｌを９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に加え、上記の濃度範囲全体をカバーする種々の抗体濃度を三連で試験する；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールのために、標識標的細胞を含むプレート中の３つのさらなるウェルに、非イオン性界面活性剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ、Sigma, St. Louis）の２％（ＶＮ）水溶液５０μｌを、抗体溶液（上記ｉｖ項）の代わりに与える；
ｖｉ）自発性放出（ＳＲ）コントロールのために、標識標的細胞を含むプレート中の３つのさらなるウェルに、ＲＰＭＩ細胞培養培地５０μｌを、抗体溶液（上記ｉｖ項）の代わりに与える；
ｖｉｉ）次いで、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離し、そして１時間４℃でインキュベートする；
ｖｉｉｉ）ＰＢＭＣ懸濁物（上記ｉ項）５０μｌを、２５：１のエフェクター：標的細胞比率を生じるように各々の細胞に加え、そしてプレートを５％ＣＯ２雰囲気下３７℃で４時間インキュベーター中に入れる；
ｉｘ）各々のウェルからの無細胞上清を回収し、そして実験的に放出された放射能（ＥＲ）をガンマカウンターを使用して定量する；
ｘ）特異的溶解の百分率を、各々の抗体濃度について、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００［ここで、ＥＲはその抗体濃度について定量される平均放射能（上記ｉｘ項参照）であり、ＭＲはＭＲコントロール（上記ｖ項参照）について定量される平均放射能（上記ｉｘ項参照）であり、そしてＳＲはＳＲコントロール（上記ｖｉ項参照）について定量される平均放射能（上記ｉｘ項参照）である］に従って算出する；
４）「増加したＡＤＣＣ」を、上記で試験する抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の増加、および／または上記で試験する抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大百分率の半分を達成するために必要とされる抗体の濃度の低下のいずれかとして定義する。ＡＤＣＣの増加は、当業者に公知である、同じ標準的な産生、精製、処方および貯蔵方法を使用して、同じ型の宿主細胞によって産生されるが、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作された宿主細胞によっては産生されていない、同じ抗体によって媒介される、上記アッセイを用いて測定される、ＡＤＣＣと相対的である。]
[0036] 前記「増加したＡＤＣＣ」を、前記抗体の糖鎖操作（glycoengineering）によって得ることができ、この手段は、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，６０２，６８４に記載のようにそのオリゴ糖成分を操作することによってモノクローナル抗体の前記天然細胞媒介性エフェクター機能を増強する。]
[0037] 用語「補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）」は、補体の存在下での本発明による抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を指す。ＣＤＣは、好ましくは、ＣＤ２０発現細胞の調製物の、本発明による抗ＣＤ２０抗体での、補体の存在下での処理によって測定される。抗体が、１００ｎＭの濃度で、２０％以上の腫瘍細胞の溶解（細胞死）を、４時間後に誘導する場合に、ＣＤＣは見出される。アッセイは、好ましくは、５１ＣｒまたはＥｕ標識腫瘍細胞および放出された５１ＣｒまたはＥｕの測定を用いて行われる。コントロールは、腫瘍標的細胞の、補体との、しかし抗体なしでの、インキュベーションを含む。]
[0038] 典型的には、ＩｇＧ１イソタイプのＩ型およびＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は特徴的なＣＤＣ特性を示す。互いに比較して、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は増加したＣＤＣを有し（ＩｇＧ１イソタイプの場合）、そしてＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は減少したＣＤＣを有する（ＩｇＧ１イソタイプの場合）。好ましくは、Ｉ型およびＩＩ型の両方の抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１イソタイプ抗体である。]
[0039] 「リツキシマブ」抗体は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作キメラヒトγ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトγ１定常ドメインを含み、そしてＷＯ９４／１１０２６（Anderson et al.）において名称「Ｃ２Ｂ８」によって同定される。リツキシマブは、再発性または不応性の低悪性度または濾胞性ＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の処置のために承認されている。インビトロ作用機構研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示すことを示した（Reff et. al, Blood 83(2): 435-445 (1994)）。さらに、それは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて有意な活性を示す。]
[0040] 用語「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインとのキメラ化およびその後のヒト化によって、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２ − Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3: 131-139 (1987)参照）から得られた、ＷＯ２００５／０４４８５９に開示されるようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指す（ＷＯ２００５／０４４８５９参照）。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＷＯ２００５／０４４８５９に詳細に開示されている。]
[0041] 好ましくは、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３〜配列番号２０（ＷＯ２００５／０４４８５９のＢ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９およびＢ−ＨＬ８〜Ｂ−ＨＬ１７）の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する。特に好ましいのは、配列番号３、４、７、９、１１、１３および１５（ＷＯ２００５／０４４８５９のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１およびＢ−ＨＬ１３）である。最も好ましくは、前記ＶＨはＢＨＨ６である。好ましくは、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＷＯ２００５／０４４８５９の配列番号２０（Ｂ−ＫＶ１）の軽鎖の可変領域（ＶＬ）を有する。さらに、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、好ましくは、ＩｇＧ１抗体である。好ましくは、そのようなヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５９、ＷＯ２００４／０６５５４０、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)およびＷＯ９９／１５４３４２に記載の手順に従って、Ｆｃ領域において糖鎖操作（ＧＥ）されている。大部分の糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域におけるグリコシル化の変化したパターンを有し、好ましくはフコース残基の低下したレベルを有する。好ましくは、Ｆｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％以上（１つの実施態様において４０％〜６０％、別の実施態様において少なくとも５０％、さらに別の実施態様において少なくとも７０％以上）が非フコシル化されている。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は好ましくはバイセクト型（bisected）である。最も好ましくは、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＷＯ２００５／０４４８５９のＶＨ Ｂ−ＨＨ６およびＶＬ Ｂ−ＫＶ１を含む。本明細書において使用する場合、前記抗体は、「ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞」ともいわれる。別の最も好ましい実施態様において、前記抗体は、上記で定義するようなフコース残基の低下したレベルを有し、そして／または、Ｆｃ領域のオリゴ糖は最も好ましくはバイセクト型である。さらに別の最も好ましい実施態様において、前記抗体は本明細書において定義するような増加したＡＤＣＣを示す。]
[0042] オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態、および特異的生物学的活性を含む、治療糖タンパク質の効力に関連する特性に有意に影響を及ぼし得る。そのような特性は、オリゴ糖の存在または非存在だけでなく、その特定の構造にも依存し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間のいくらかの一般化がなされ得る。例えば、特定のオリゴ糖構造は、特定の炭水化物結合タンパク質との相互作用を通じて血流からの糖タンパク質の迅速なクリアランスを媒介し、一方、他のものは、抗体によって結合され、そして所望されない免疫反応を誘発し得る（Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)）。]
[0043] ヒト適用のために最も適合性の形態でタンパク質をグリコシル化するその能力に起因して、哺乳動物細胞は、治療糖タンパク質の産生のために好ましい宿主である（Cumming et al., Glycobiology 1:115-30 (1991)；Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14:975-81 (1996)）。細菌は、非常に稀にタンパク質をグリコシル化し、そして他の型の一般的な宿主、例えば酵母、糸状菌、昆虫および植物細胞のように、血流からの迅速なクリアランス、所望されない免疫相互作用、および、いくつかの特定の場合、低下した生物学的活性に関連するグリコシル化パターンを生じる。哺乳動物細胞の中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、この２０年の間で最も一般的に使用されている。適切なグリコシル化パターンの付与に加えて、この細胞は、遺伝的に安定な高度に生産的なクローン細胞株の一貫した生成を可能にする。それは、無血清培地を使用して単純なバイオリアクター中で高密度に培養されることができ、そして安全なそして生産的なバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に使用される動物細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯおよびＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞を含む。より最近では、トランスジェニック動物からの産生も試験されている（Jenkins et al., Nature Biotechnol. 14: 975-981 (1996)）。]
[0044] 全ての抗体は、重鎖定常領域中の保存された位置に炭水化物構造を含んでおり、各々のイソタイプはＮ結合型炭水化物構造の異なる配列を有し、これはタンパク質の集合、分泌または機能的活性に可変性に影響を及ぼす（Wright, A., and Monison, S. L., TrendsBiotech. 15: 26-32 (1997)）。結合したＮ結合型炭水化物の構造は、プロセシングの程度に依存してかなり変動し、そして高マンノース、多分岐（multiply-branched）および二分岐（biantennary）複合オリゴ糖を含み得る（Wright, A., and Morrison, S. L., Trends Biotech. 15: 26-32 (1997)）。典型的には、特定のグリコシル化部位に結合したコアオリゴ糖構造の不均一なプロセシングが存在し、その結果、モノクローナル抗体でさえ複数のグリコフォームとして存在する。同様に、抗体グリコシル化の大きな差異が細胞株の間で生じ、そして小さな差異さえも異なる培養条件下で増殖させた所与の細胞株について見られることが示されている（Lifely, M. R. et al., Glycobiology 5(8):813-22 (1995)）。]
[0045] 単純な産生プロセスを維持し、そして有意な所望されない副作用を潜在的に回避しながら、効力の大きな増加を得るための１つの方法は、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17:176-180 (1999)およびＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，６０２，６８４に記載のようにそのオリゴ糖成分を操作することによってモノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を増強することである。癌免疫療法において最も一般的に使用されている抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各々のＣＨ２ドメイン中のＡｓｎ２９７に保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋められて、ポリペプチド骨格との広範な接触を形成し、そしてその存在は抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のようなエフェクター機能を媒介するために重要である（Lifely, M. R., et al., Glycobiology 5: 813-822 (1995)；Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163: 59-76 (1998)；Wright, A. and Morrison, S. L., TrendsBiotechnol. 15: 26-32 (1997)）。]
[0046] チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（”ＧｎＴＩＩＩ７ｙ）（バイセクト型オリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼ）の過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞によって産生される抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に増加させることが以前に示された（Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17: 176-180 (1999)；およびＷＯ９９／１５４３４２（その内容全体を本明細書に参照により組み入れる）参照）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性および特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な工業的細胞株において産生させた場合に臨床的に有用であるためには少なすぎる効力を有する非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17: 176-180 (1999)）。抗体産生細胞をＧｎＴＩＩＩを発現するように操作することによってＡＤＣＣ活性の大きな増加を得ることができ、これはまた定常領域（Ｆｃ）結合バイセクト型オリゴ糖（バイセクト型非フコシル化オリゴ糖を含む）の割合の、天然の抗体において見出されるレベルより上への増加を導くことが、この研究によって最初に示された。]
[0047] 用語「ＣＤ２０抗原の発現」は、それぞれ腫瘍または癌、好ましくは非固形腫瘍由来の、細胞における、好ましくはＴまたはＢ細胞、より好ましくはＢ細胞の細胞表面上での、ＣＤ２０抗原の有意なレベルの発現を示すことが意図される。「ＣＤ２０発現癌」を有する患者を、当技術分野において公知の標準的なアッセイによって決定することができる。「ＣＤ２０抗原の発現」はまた、好ましくは、自己免疫疾患における、細胞における、好ましくはＴまたはＢ細胞、より好ましくはＢ細胞の細胞表面上での、ＣＤ２０抗原の有意なレベルの発現を示すことが意図される。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳを使用して、または対応するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出を介して測定される。]
[0048] 本明細書において使用する用語「ＣＤ２０発現癌」は、好ましくは、リンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））およびリンパ球性白血病を指す。そのようなリンパ腫およびリンパ球性白血病は、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非切れ込み核細胞性リンパ腫／バーキットリンパ腫（風土性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫および非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）周辺帯リンパ腫（節外周辺帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、結節周辺帯Ｂ細胞リンパ腫および脾臓周辺帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞型リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発性Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリー細胞白血病、ｇ）リンパ球性白血病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ｉ）形質細胞腫瘍、形質細胞性骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病を含む。]
[0049] 好ましくは、ＣＤ２０発現癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。特に、ＣＤ２０発現癌は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、周辺帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、または原発性ＣＮＳリンパ腫である。]
[0050] 本明細書において使用する「自己免疫疾患」は、個体自体の組織から生じそれに対する疾患または障害に関する。自己免疫疾患または障害の例は、限定するものではないが、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節炎、乾癬性関節炎）、乾癬、皮膚炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、中毒性表皮壊死症、全身性強皮症および硬化症、炎症性腸疾患に関連する応答、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸促迫症候群、成人呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、脳炎、ブドウ膜炎、大腸炎、糸球体腎炎、アレルギー症状、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤および慢性炎症応答を含む症状、アテローム動脈硬化、自己免疫性心筋炎、白血球粘着不全、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、若年発症糖尿病、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインおよびＴリンパ球によって媒介される急性遅延型過敏症に関連する免疫応答、結核、サルコイドーシス、ウェゲナー肉芽腫症を含む肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（ＡＮＣＡを含む）、再生不良性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球ろう（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠損症、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球血管外漏出を含む疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害、多臓器傷害症候群、重症筋無力症、抗原抗体複合体媒介性疾患、抗糸球体基底膜抗体病、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン筋無力症症候群、レイノー症候群、シューグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、水疱性類天疱瘡、天疱瘡、自己免疫性多腺性内分泌不全症、腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチーまたはＩｇＭ媒介性ニューロパチー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性精巣炎および卵巣炎を含む精巣および卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎を含む自己免疫性内分泌疾患、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、多腺性自己免疫症候群（または多腺性Ｉ内分泌疾患症候群）インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）ともいわれるＩ型糖尿病およびシーハン症候群；自己免疫性肝炎、リンパ球様間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＳＩＰ、ギラン・バレー症候群、大血管脈管炎（リウマチ性多発筋痛症および巨細胞（高安）動脈炎を含む）、中血管脈管炎（川崎病および結節性多発動脈炎を含む）、強直性脊椎炎、ベルジェ病（ＩｇＡ腎症）、急速進行性糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアックスプルー（グルテン腸症）、クリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、冠動脈疾患などを含む。]
[0051] 本発明に従って使用される抗体の治療処方物は、所望の純度を有する抗体を随意の薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定化剤（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）と、混合することによって、凍結乾燥処方物または水溶液の形態で、貯蔵のために調製される。許容され得る担体、賦形剤、または安定化剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントに対して無毒性である。]
[0052] 本明細書において使用する用語「界面活性剤」は、薬学的に許容され得る界面活性剤を示す。本発明の処方物において、界面活性剤の量は、重量／容量で表現される百分率で記載される。最も一般的に使用される重量／容量単位はｍｇ／ｍＬである。適切な薬学的に許容され得る界面活性剤は、限定するものではないが、非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。さらに、限定するものではないが、ポリエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステル、ポリエチレン−ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン−ステアラートおよびドデシル硫酸ナトリウムが含まれる。好ましいポリエチレン−ソルビタンは、ポリエチレン（２０）−ソルビタン−エステル（商標Ｔｗｅｅｎ２０（商標）の下に販売されているポリソルベート２０と同義語）およびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート（商標Ｔｗｅｅｎ８０（商標）の下に販売されているポリソルベート８０と同義語）である。好ましいポリエチレン−ポリプロピレングリコールは、名称プルロニック（登録商標）Ｆ６８またはポロクサマー１８８（商標）の下に販売されているものである。最も好ましいのはポロクサマー１８８（商標）である。好ましいポリオキシエチレン−ステアラートは、商標Ｍｙｒｊ（商標）の下に販売されているものである。好ましいポリオキシエチレン−モノラルリルエーテルは、商標Ｂｒｉｊ（商標）の下に販売されているものである。ポリエチレン−ソルビタン−ポリエチレン（２０）−ソルビタン−エステル（Ｔｗｅｅｎ２０（商標）およびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））を使用する場合、それらを一般に約０．００１〜約１％、好ましくは約０．００５〜約０．１％、さらに好ましくは約０．０１％〜０．０４％ｗ／ｖの量で使用する。]
[0053] 本明細者において使用する用語「バッファー」は、薬学的に許容され得るバッファーを示す。適切な薬学的に許容され得るバッファーは、限定するものではないが、ヒスチジンバッファー、クエン酸バッファー、コハク酸バッファー、酢酸バッファーおよびリン酸バッファーを含む。好ましいバッファーは、Ｌ−ヒスチジンまたはＬ−ヒスチジンのＬ−ヒスチジン塩酸塩との混合物を等張剤および潜在的に当技術分野において公知の酸または塩基でのｐＨ調整とともに含む。Ｌ−ヒスチジンが最も好ましい。上記のヒスチジンバッファーは、一般に、約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、好ましくは約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、さらにより好ましくは約２０ｍＭの量で使用される。使用されるバッファーにかかわらず、ｐＨは当技術分野において公知の酸または塩基での調整によって、またはバッファー成分の適切な混合物を使用することによって、またはその両方で、約４．５〜約７．０、好ましくは約５．５〜約６．５、さらに好ましくは約６．０を含む値に調整される。]
[0054] 本明細書において使用する用語「等張剤」は、薬学的に許容され得る等張剤を示す。等張剤は等張性処方物を提供するために使用される。等張性処方物は、液体、または固体形態（例えば、凍結乾燥形態）から再構成された液体であり、そして生理食塩溶液および血清のような、それが比較される何らかの他の溶液と同じ浸透圧を有する溶液を示す。適切な等張剤は、限定するものではないが、塩（限定するものではないが、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）または塩化カリウムを含む）、糖（限定するものではないが、グルコース、スクロース、トレハロースまたはグリセリンを含む）およびアミノ酸、糖、塩およびその組み合わせの群からの任意の成分を含む。等張剤は、一般に、約５ｍＭ〜約３５０ｍＭの全量で使用される。]
[0055] 本発明による処方物に関連して本明細書において使用する用語「液体」は、少なくとも約２〜約８℃の温度で液体である処方物を示す。]
[0056] 本発明による処方物に関連して本明細書において使用する用語「凍結乾燥」は、処方物を凍結し、その後氷を凍結内容物から当技術分野において公知の任意の凍結乾燥方法（例えば、市販の凍結乾燥デバイス）によって昇華させることによって乾燥させた処方物を示す。]
[0057] 本明細書において使用する用語「塩」は、約１ｍＭ〜約５００ｍＭの量の塩を示す。塩の非限定的な例は、カチオンであるナトリウム、カリウム、カルシウムまたはマグネシウムの、アニオンである塩素、リン酸、クエン酸、コハク酸、硫酸またはその混合物との任意の組み合わせの塩を含む。]
[0058] 本明細書において使用する用語「アミノ酸」は、限定するものではないが、アルギニン、グリシン、オルニチン、グルタミン、アスパラギン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリンを含む、約１〜約１００ｍｇ／ｍＬの量のアミノ酸を示す。]
[0059] 本明細書において使用する用語「糖」は、約２５ｍＭ〜約５００ｍＭの量で使用される薬学的に許容され得る糖を示す。１００〜３００ｍＭが好ましい。２２０〜２６０ｍＭがより好ましい。２４０ｍＭが最も好ましい。適切な糖は、限定するものではないが、単糖および二糖を含む。本発明による糖の非限定的な糖は、トレハロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン（いわゆる「メグルミン」）、ガラクトサミンおよびノイラミン酸およびその組み合わせを含む。トレハロースが最も好ましい。]
[0060] 用語「安定化剤」は、例えば、限定するものではないが、上記の節において記載するようなアミノ酸および糖ならびに当技術分野において公知のような任意の種類および分子量の市販のデキストランのような薬学的に許容され得る安定化剤を指す。]
[0061] 用語「抗酸化剤」は、薬学的に許容され得る抗酸化剤を示す。これは、メチオニン、ベンジルアルコールまたは酸化を最小化するために使用される任意の他の賦形剤のような賦形剤を含み得る。]
[0062] 例えば癌に適用される場合の、用語「処置方法」またはその相当語句は、患者における癌細胞の数を低下させるかまたは除去するように、または癌の症候を軽減するように設計された作用の過程または手順を指す。癌または別の増殖性障害の「処置方法」は、癌細胞または他の障害が実際に除去されること、障害または細胞の数が実際に低下されること、または癌または他の障害の症候が実際に軽減されることをを必ずしも意味しない。しばしば、癌の処置方法は、低いが、患者の病歴および評価される生存予期を仮定すると、それにもかかわらず全体的な有益な作用の過程を誘導すると見なされる成功の見込みでさえ行われる。]
[0063] １つの局面において、本発明は、以下を含む抗ＣＤ２０抗体処方物に関する：
− 約１〜約１５０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０抗体、
− 約０．００１〜約１％の少なくとも１つの界面活性剤、および
− 約１〜約１００ｍＭのバッファー、
− ｐＨ約４．５〜約７．０。]
[0064] より好ましい実施態様において、本発明による処方物は以下を含む：
− 約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ２０抗体、
− 約０．００５〜約０．０５％の少なくとも１つの界面活性剤、および
− 約１〜約１００ｍＭのバッファー、
− ｐＨ約４．５〜約７．０。]
[0065] 好ましい実施態様において、本発明による処方物は以下を含む：
− 約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、
− ２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、
− ２４０ｍＭトレハロース、および
− ０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
− ｐＨ約６。]
[0066] さらに別の好ましい実施態様において、本発明による処方物は以下を含む：
− 約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、
− ０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
− ２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
− ２４０ｍＭトレハロース、
− ｐＨ約６。]
[0067] 好ましくは、抗ＣＤ２０抗体はＩ型抗体である。より好ましくは、抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗体である。さらにより好ましくは、抗ＣＤ２０抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５９に詳細に開示されるような「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」である。より好ましくは、抗体はＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞である。処方物は、１〜約１５０ｍｇ／ｍｌの前記抗体、より好ましくは約５〜約１００ｍｇ／ｍｌの前記抗体、さらにより好ましくは約１０〜約３０ｍｇ／ｍｌの前記抗体、または約５、１０、１５、２０、２５または３０ｍｇ／ｍｌの群から選択される前記抗体、最も好ましくは２５ｍｇ／ｍｌの前記抗体を含む。]
[0068] 本発明による処方物は、液体形態、凍結乾燥形態または凍結乾燥形態から再構成された液体形態であることができる。]
[0069] １つの実施態様において、本発明による処方物は凍結乾燥処方物である。本発明による凍結乾燥処方物は、記載される抗ＣＤ２０抗体の同じ濃度の液体処方物では達成が通常困難であるより高い分子量の微粒子および凝集物の形成に関する改善された安定性の利点を有する。]
[0070] 本発明による処方物を、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）または医薬分野において公知のもののような任意の他の非経口投与手段によって投与することができる。]
[0071] さらに、本発明による処方物は、保存料（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）を含んでもよい。]
[0072] 活性成分は、例えばコアセルベーション技術または種間（interracial）重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおける、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリラート）マイクロカプセル中に封入されてもよい。そのような技術はRemington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。]
[0073] 徐放性調製物を調製し得る。徐放性調製物の適切な例は、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、このマトリックスは成型物（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形態である。徐放性マトリックスの例は、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（ＵＳ３，７７３，９１９）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタミンのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用マイクロスフェア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。]
[0074] インビボ投与のために使用しようとする処方物は無菌でなければならない。これは無菌濾過メンブランを通した濾過によって容易に達成される。]
[0075] 好ましくは、本発明の処方物は、本明細書において上記で定義するような約５ｍＭ〜約３５０ｍＭの量の１つ以上の等張剤を含む。]
[0076] 好ましくは、本発明の処方物は、本明細書において上記で定義するような約２５ｍＭ〜約５００ｍＭの量の糖を含む。]
[0077] 好ましくは、また、本発明の処方物は、以下の成分の１つ以上をさらに含む：抗酸化剤、アスコルビン酸、グルタチオン、保存料、例えばｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルブタノール、チオメルサール、塩化ベンザルコニウム、ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ３０００、３３５０、４０００、６０００、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、多価アルコール、グリセロール、エタノール、マンニトール、塩、酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム）、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、トロメタミン、ＥＤＴＡ（例えば、Ｎａ−ＥＤＴＡ）。]
[0078] 好ましくは、また、本発明の処方物は、本明細書において上記で定義するような１つ以上の安定化剤および、当技術分野において公知のような糖、糖アルコール、アミノ酸およびデキストランなどの当技術分野において「凍結乾燥保護剤（lyoprotectant）」としても知られる成分をさらに含む。]
[0079] 特定の実施態様において、本発明の処方物は、液体、凍結乾燥、または凍結乾燥形態から再構成された液体のいずれかの以下の処方物を含む：
１５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ６．０；
または
１０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ６．０；
または
１５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
場合により、０．００１〜１％ｗ／ｖの界面活性剤、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、
ｐＨ６．０；
または
１０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ酢酸塩、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ５．５；
または
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ酢酸塩、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ５．５；
または
３０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２００ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．５。]
[0080] 本発明による処方物の好ましい実施態様において、処方物は凍結乾燥形態であり、そして適切な量の注射用水での再構成後に以下を含む：
１０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０。]
[0081] この処方物は、凝集のような物理的エンドポイントおよび断片化のような化学的エンドポイントに関して十分な安定性で２〜８℃および２５℃での貯蔵に際して良好な安定性を示す。]
[0082] 本発明による処方物の好ましい実施態様において、処方物は液体形態である：
２５ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、最も好ましくはＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０。]
[0083] 好ましい実施態様において、処方物は、ＣＤ２０発現癌に罹患する患者における転移またはさらなる散在の防止または低下のために有用である。処方物は、そのような患者の生存期間の増加、そのような患者の無進行生存の増加、応答の持続期間の増加のために有用であり、生存期間、無進行生存、応答率または応答の持続期間によって測定されるような処置される患者の統計的に有意なそして臨床的に意味のある改善を生じる。好ましい実施態様において、処方物は、患者の群における応答率の増加のために有用である。]
[0084] 本発明の関連で、さらなる他のサイトカイン、化学療法剤または抗癌剤、またはそのような薬剤の効果を増強する化合物を、本発明による抗ＣＤ２０抗体処方物と組み合わせて使用してもよい。]
[0085] そのような薬剤は、例えば、以下を含む：アルキル化剤またはアルキル化作用を有する薬剤、例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばシトキサン（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例えばリューケラン（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えばプラチノール（登録商標））、ブスルファン（例えば、ミレラン（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなど；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばベプシド（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えばゼローダ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）など；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ，ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えばアドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンなど；アルカロイド、例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンなど；および他の抗腫瘍剤、例えばパクリタキセル（例えばタキソール（登録商標））およびパクリタキセル誘導体、細胞分裂阻害剤、グルココルチコイド、例えばデキサメタゾン（ＤＥＸ；例えばデカドロン（登録商標））およびコルチコステロイド、例えばプレドニゾン、ヌクレオシド酵素阻害剤、例えばヒドロキシウレア、アミノ酸枯渇酵素、例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリンおよび他の葉酸誘導体、および類似の多様な抗腫瘍剤。以下の薬剤をさらなる薬剤として使用してもよい：アミフォスチン（arnifostine）（例えばエチオール（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えばドキシル（登録商標））、ゲムシタビン（例えばジェムザール（登録商標））、ダウノルビシン リポ（例えばダウノキソーム（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばタキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンβ、インターフェロンα、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル。好ましくは、抗ＣＤ２０抗体併用処置はそのようなさらなる薬剤なしで使用される。]
[0086] 化学療法レジメンにおける上記の細胞傷害性薬物および抗癌剤ならびに抗増殖性標的特異的抗癌薬、例えばプロテインキナーゼ阻害剤の使用は、癌治療の技術分野において一般に十分に特徴付けられており、そしてそれらの使用は、本明細書において、いくらかの調節を伴って、寛容および有効性のモニタリングおよび投与経路および投与量の制御のための同じ考慮に入る。例えば、細胞傷害性薬剤の実際の投与量は、組織培養方法を使用することによって決定される患者の培養細胞応答に依存して変動し得る。一般に、投与量は、さらなる他の薬剤の非存在下で使用される量と比較して低下する。]
[0087] 有効な細胞傷害性薬剤の典型的な投与量は、製造業者によって推奨される範囲内であることができ、そしてインビトロ応答または動物モデルにおける応答によって示される場合、およそ一桁の濃度または量まで低下させられ得る。従って、実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、および初代培養悪性細胞または組織培養組織試料のインビトロ応答性、または適切な動物モデルにおいて観察される応答に基づく治療方法の有効性に依存する。]
[0088] 本発明の関連で、本発明による抗ＣＤ２０抗体処方物に加えて、有効量のイオン化照射を行ってもよく、そして／または放射性医薬品を使用してもよい。放射線源は、処置される患者の外側または内側のいずれかであることができる。線源が患者の外側である場合、治療は外照射（ＥＢＲＴ）として知られる。線源が患者の内側である場合、処置は組織内照射（ＢＴ）と呼ばれる。本発明の関連での使用のための放射性原子を、限定するものではないが、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨード−１２３、ヨード−１３１、およびインジウム−１１１を含む群から選択することができる。そのような放射性同位体で抗体を標識することもまた可能である。好ましくは、本発明による抗ＣＤ２０抗体処方物はそのようなイオン化照射なしで使用される。]
[0089] 放射線療法は、切除不能または手術不能の腫瘍および／または腫瘍転移を制御するための標準的な処置である。放射線療法が化学療法と組み合わされた場合、改善された結果が見られている。放射線療法は、標的領域に送達される高線量照射が腫瘍および正常組織の両方における繁殖細胞の死を生じるという原理に基づいている。放射線量レジメンは、一般に照射吸収線量（Ｇｙ）、時間および分画の点から規定され、そして腫瘍学者によって慎重に規定されなければならない。患者が受ける照射の量は種々の考慮に依存するが、２つの最も重要なものは、身体の他の重要な構造または器官との関連での腫瘍の位置、および腫瘍が広がった程度である。放射線療法を受けている患者のための処置の典型的なコースは、週に５日、約１．８〜２．０Ｇｙの単回一日画分で患者に投与される１０〜８０Ｇｙの総線量を用いる、１〜６週の期間にわたる処置スケジュールである。本発明の好ましい実施態様において、ヒト患者中の腫瘍が本発明による処方物および照射を用いて処置される場合、相乗作用が存在する。換言すると、本発明の組み合わせを含む薬剤による腫瘍成長の阻害は、照射と、場合によりさらなる化学療法剤または抗癌剤と組み合わされた場合、増強される。アジュバント放射線療法のパラメーターは、例えば、ＷＯ９９／６００２３に含まれている。]
[0090] 抗体処方物は、公知の方法に従って、ボーラスとしてのまたは一定期間にわたる連続注入による静脈内投与によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内またはくも膜腔内経路によって、患者に投与される。抗体の静脈内または皮下投与が好ましい。]
[0091] 本発明は、容器、抗ＣＤ２０抗体の前記処方物を含む容器内の組成物、および処方物の使用者にＣＤ２０発現癌に罹患する患者への抗ＣＤ２０抗体の前記処方物の投与を指示する添付文書を含むことを特徴とするキットをさらに含む。]
[0092] 用語「添付文書」は、治療製品の市販パッケージに慣習的に含まれる説明書を指し、これは、そのような治療製品の使用に関する効能、用法、投与量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含み得る。]
[0093] 好ましい実施態様において、製品容器は、薬学的に許容され得る担体をさらに含み得る。製品は、好ましくは別々のさらなる容器中に貯蔵される、無菌希釈剤をさらに含み得る。]
[0094] 本明細書において使用する「薬学的に許容され得る担体」は、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤、および医薬投与に適合性の他の材料および化合物を含む、医薬投与に適合性の任意のそして全ての材料を含むことが意図される。任意の従来の媒質または薬剤が活性化合物と不適合性でない限り、本発明の組成物におけるその使用が意図される。補足の活性化合物を組成物中に組み入れることもできる。]
[0095] 本発明のさらに別の実施態様において、本発明による処方物は、本発明によるＩＩ型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されるＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む。本発明による処方物は抗ＣＤ２０抗体の各々のための２つの別々の処方物であってもよい。あるいは、本明細書における処方物は、１つの処方物中に両方の抗体を含んでもよい。]
[0096] 本発明のさらに別の実施態様において、本発明による処方物は、抗Ｂｃｌ−２活性薬剤と同時投与される、抗ＣＤ２０抗体を含む。本明細書において使用する用語「Ｂｃｌ−２」は、タンパク質のＢｃｌ−２ファミリーのメンバーである、Ｂｃｌ−２タンパク質（Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ． Ｐ１０４１５）を指す。用語「抗Ｂｃｌ−２活性薬剤」は、「抗Ｂｃｌ−２アンチセンスヌクレオチド」および「Ｂｃｌ−２阻害剤」を含む。「抗Ｂｃｌ−２アンチセンスヌクレオチド」は、Ｂｃｌ−２ｍＲＮＡレベルをダウンレギュレートし、そしてＢｃｌ−２タンパク質発現を低下させる。そのような抗Ｂｃｌ−２アンチセンスヌクレオチドの例は、オブリメルセンおよびＳＰＣ−２９９６を含む。本明細書において使用するＡＢＴ−７３７は、ＷＯ２００６／０９９６６７またはCorey, S., et al., Cancer Cell (2005) 5-6に記載される、Ｂｃｌ−２阻害剤である、Ｎ−［４−［４−（４’−クロロビフェニル−２−イルメチル）ピペラジン−１−イル］ベンゾイル］−３−［３−（ジメチルアミノ）−１（Ｒ）−（フェニルスルファニルメチル）プロピルアミノ］−４−ニトロベンゼンスルホンアミド；４−［４−（４’−クロロビフェニル−２−イルメチル）ピペラジン−１−イル］−Ｎ−［３−［３−（ジメチルアミノ）−１（Ｒ）−（フェニルスルファニルメチル）プロピルアミノ］−４−ニトロフェニルスルホニル］ベンズアミドを意味する。本明細書において使用するＢＴ−２６３は、ＵＳ２００７０２７１３５に記載される、Ｂｃｌ−２阻害剤を意味する。好ましくは、抗Ｂｃｌ−２活性薬剤は、オブリメルセン、ＳＰＣ−２９９６、ＴＡ−４０２、ゴシポール、ＡＴ−１０１、オバトクラックスメシラート（Obatoclax mesylate）、Ａ−３７１１９１、Ａ−３８５３５８、Ａ−４３８７４４、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１、ＢＬ−１１、ＢＬ−１９３、ＧＸ−１５−００３、２−メトキシアンチマイシンＡ３、ＨＡ−１４−１、ＫＦ−６７５４４、プルプロガリン、ＴＰ−ＴＷ−３７、ＹＣ−１３７およびＺ−２４から選択される。好ましくは、抗Ｂｃｌ−２活性薬剤は、５μＭ以下の抗Ｂｃｌ−２阻害活性のＩＣ５０を有するＢｃｌ−２タンパク質結合阻害剤である。そのようなＢｃｌ−２タンパク質結合阻害剤は、好ましくは、ゴシポール、ＡＴ−１０１、オバトクラックスメシラート、ＡＢＴ−２６３およびＡＢＴ−７３７から、より好ましくはＡＢＴ−２６３またはＡＢＴ−７３７から選択される。]
[0097] 本発明のさらに別の実施態様において、本発明による処方物は、プロテアソーム阻害剤と同時投与される、抗ＣＤ２０抗体を含む。本明細書において使用する用語「プロテアソーム阻害剤」は、２６Ｓプロテアソームの活性を阻害する薬剤を指す。そのようなプロテアソーム阻害剤は、とりわけ、例えば、ペプチド誘導体、例えばペプチドアルデヒド（例えば、ＭＧ１３２、ＭＧ１１５、ＣＥＰ−１６１５、ＰＳＩ、またはイムノプロテアソーム特異的阻害剤ＩＰＳＩ−００１（Ｃｂｚ−ＬｎＬ−ＣＨＯ ＝ Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシナール、ＵＳ２００６０２４１０５６参照）、ペプチドボロン酸（peptide bronate）（例えば、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）またはＤＦＬＢ）、ペプチドエポキシケトン（例えば、エポキソミシン、ジヒドロエポネマイシン、またはエポキソミシン誘導体カーフィルゾミブ（ＰＲ−１７１））、またはペプチドビニルスルホン（例えば、ＮＬＶＳ）および非ペプチド誘導体、例えばサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）、サリノスポラミドＡ誘導体、ラクタシスチンまたはラクタシスチン誘導体（例えば、クラスト−ラクタシスチン−Ｌ−ラクトン（オムラリド）またはＰＳ−５１９）を含む。様々な型および構造の前記プロテアソーム阻害剤が、例えば、Kisselev, A.L., et al., Chem Biol (2001) 739-758、ＷＯ２００４／００４７４９およびJoazeiro, C., et al., Res 66(16) (2006) 7840-7842、Kanagasabaphy, et al., Curr Opin Investig Drugs 8 (2007) 447-51、Adams, J., Nat Rev Cancer 4 (2004) 349-360およびＵＳ２００６０２４１０５６に記載されている。]
[0098] 好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド（好ましくは、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシナール（ＩＰＳＩ−００１））、ペプチドボロン酸（好ましくは、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１））、ペプチドエポキシケトン（好ましくは、エポキソミシン誘導体カーフィルゾミブ（ＰＲ−１７１））、またはサリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）から選択される。より好ましくは、そのようなプロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）、カーフィルゾミブ（ＰＲ−１７１）、サリノスポラミドＡ（ＮＰＩ−００５２）またはＮ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシナール（ＩＰＳＩ−００１）から選択される。]
[0099] 好ましい実施態様において、プロテアソーム阻害剤は、ペプチドアルデヒド（好ましくは、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシナール（ＩＰＳＩ−００１））、ペプチドボロン酸（好ましくは、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１））またはペプチドエポキシケトンから選択されるペプチド誘導体である。別の好ましい実施態様において、プロテアソーム阻害剤は、ペプチドボロン酸（好ましくは、ボルテゾミブ（ＰＳ−３４１）；例えば、Adams, Cur. Opin. Chem Biol. 6 (2002) 493-500およびＵＳ ５，７８０，４５４参照）である。]
[0100] 好ましくは、プロテアソーム阻害剤は、５μＭ以下、より好ましくは１μＭ以下の抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０を有する。そのようなプロテアソーム阻害剤の同定のためおよび抗プロテアソーム阻害活性のＩＣ５０の決定（段階希釈および非線形曲線あてはめ（ＸＬｆｉｔソフトウェア（ID Business Solution Ltd., Guilford, Surrey, UK））を使用する算出を介する）のための細胞に基づくアッセイは、Ｕ２６６細胞（ヒト形質骨髄腫）とともにPromegaからのＰｒｏｔｅａｓｏｍｅ−Ｇｌｏ（商標）Ｃｅｌｌ−Ｂａｓｅｄ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔを使用するMoravec, et al., Cell Notes 15 (2006) 4-7に記載されている。この「添加−混合−測定（add-mix-measure）」アッセイは培養細胞におけるプロテアソームに関連するキモトリプシン様プロテアーゼ活性を測定する。]
[0101] ＩＰＳＩ−００１（Ｃｂｚ−ＬｎＬ−ＣＨＯ ＝ Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシナール）に加えて、ＵＳ ２００６０２４１０５６の以下のペプチド誘導体も好ましいプロテアソーム阻害剤である：Ｎ−カルボベンジルオキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−アラニル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−アラニル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−フェニルアラニル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニラール、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−アラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンボロン酸、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−アラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−アラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンメチルビニルスルホン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ノルロイシンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ホモフェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−アラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−アラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−グリシル−プロリル−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン、Ｎ−カルボベンジルオキシ−ロイシル−ロイシル−フェニルアラニンエポキシケトン、およびＮ−カルボベンジルオキシ−グリシル−フェニルアラニル−フェニルアラニンエポキシケトン。]
[0102] 以下の実施例および図は、本発明の理解を助けるために提供され、その真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載される。本発明の精神から逸脱することなしに記載する手順において改変がなされ得ることが理解される。]
[0103] 実施例
実施例１
液体、凍結乾燥、または凍結乾燥形態から再構成された液体のいずれかの以下の処方物を調製した：
１５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ６．０；

１０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ６．０；

１５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、
ｐＨ６．０；

１０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；

２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０。]
[0104] 適切な量の注射用水での再構成後に以下を含む凍結乾燥形態も調製した：
１０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０。]
[0105] この処方物は、凝集のような物理的エンドポイントおよび断片化のような化学的エンドポイントに関して十分な安定性で２〜８℃および２５℃での貯蔵に際して良好な安定性を示す。]
[0106] 本発明による非経口投与用の液体および凍結乾燥薬物産物処方物を以下のように開発した：]
[0107] 液体処方物の調製
ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の処方物を、生産バッファー（例えば、２０ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ約６．０）、または１４０ｍＭ塩化ナトリウムおよび０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０を含む２０ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ約６．０））中のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の溶液の均質化によって調製した。ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の処方物を、バッファーでの希釈によってタンパク質濃度を所望の濃度に調整することによって調製することもできる。タンパク質の安定化のためおよび等張性調整のための賦形剤を必要に応じて加えた。これを溶解形態であるいは固体として加えることができる。界面活性剤を処方物にストック溶液として必要に応じて加えた。全ての処方物を０．２２μｍフィルターを通して無菌濾過し、そして無菌ガラスバイアル中に無菌的に小分けし、そしてゴム栓およびアルクリンプ（alucrimp）キャップで閉じた。これらの処方物を様々な温度で様々な時間間隔で貯蔵し、そして個々の段落に示す時点で分析のために取り出した。処方物を、１）ＵＶ分光光度法によって、２）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、３）可視および可視下（subvisible）粒子について、４）イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）によって、そして５）溶液の濁度によって分析した。]
[0108] 凍結乾燥処方物の調製
ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の溶液を、液体処方物について上記したように調製するか、または糖および界面活性剤を含む２０ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ約６．０）中のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞溶液を均質化することによって製造するかのいずれかをした。全ての処方物を０．２２μｍフィルターを通して無菌濾過し、そして無菌ガラスバイアル中に無菌的に小分けした。バイアルを凍結乾燥プロセスにおける使用のために適切なゴム栓である程度閉め、そして凍結乾燥器の乾燥チャンバーに移した。当技術分野において公知の任意の凍結乾燥方法が本発明の範囲内にあることが意図される。例えば、本研究のために使用される凍結乾燥プロセスは、処方物の室温から約５℃への冷却（事前冷却）およびそれに続く約１℃／分〜５℃／分のランプ速度（rampingrate）での−４０℃での凍結（凍結Ｉ）を含んだ。第１の乾燥工程は、０．３〜０．５℃／分のランプ速度で−４０℃から−３０℃まで生じ、次いで、−３０℃で少なくとも５０時間、約７５〜８０ｍＴｏｒｒのチャンバー圧で保持することができる。第２の乾燥工程は、０．１〜０．３℃／分のランプ速度で−３０℃から２５℃まで生じ、そして、２５℃で少なくとも５時間、約５０〜８０ｍＴｏｒｒのチャンバー圧で保持することができる（適用された乾燥スケジュールを表１に与える）。記載した凍結乾燥プロセスを使用して乾燥させたＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞処方物は、約２〜３分の好都合に迅速な再構成時間を有することが見出された。本研究における全ての凍結乾燥ケーキは、カール・フィッシャー方法によって決定した場合約０．１〜１．０％の残存水含量を有した。凍結乾燥バイアルを様々な温度で様々な時間間隔で貯蔵した。凍結乾燥処方物を、１）ＵＶ分光光度法による分析、２）再構成時間の決定、３）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による分析、４）イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）による分析、５）可視下および可視粒子の決定、および６）溶液の濁度による分析の前にそれぞれの容量の注射用水（ＷＦＩ）で再構成した。]
[0109] サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、処方物中の可溶性高分子量種（凝集物）および低分子量加水分解産物を検出するために行った。方法は、ＵＶ検出器（検出波長２８０ｎｍ）およびＺｏｒｂａｘ ＧＦ−２５０カラム（９．４×２５０ｍｍ、Agilent）を備えた適切なＨＰＬＣ機器を使用した；方法は２００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）を移動相として使用した。]
[0110] イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を、処方物中のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の実効電荷を変化させる化学分解産物を検出するために行った。方法は、ＵＶ検出器（検出波長２２０および２８０ｎｍ）およびＤｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ−１０カラム（４ｍｍ×２５０ｍｍ）を備えた適切なＨＰＬＣ機器を使用した。Ｈ２Ｏ中の１０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）および１０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）＋０．７５Ｍ ＮａＣｌをそれぞれ移動相ＡおよびＢとして、１．０ｍＬ／分の流速で使用した。]
[0111] タンパク質濃度の決定のためのＵＶ分光光度法をＶａｒｉａｎ Ｃａｒｙ Ｂｉｏ ＵＶ分光光度計上で２８０ｎｍで行った。]
[0112] 濁度の決定のために、乳光をＨＡＣＨ ２１００ＡＮ濁度計を室温で使用してＦＴＵ（濁度単位）で測定した。]
[0113] 試料を、可視下粒子についてＨＩＡＣ Ｒｏｙｃｏ ＰｈａｒｍａＳｐｅｃ（ＨＲＬＤ−１５０）を使用することによって、そして可視粒子についてＳｅｉｄｅｎａｄｅｒ Ｖ９０−Ｔ視覚検査機器を使用することによって分析した。]
[0114] ]
[0115] 本発明による液体ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞薬物産物処方物の安定性データ
処方物 １５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、ｐＨ６．０、]
[0116] ]
[0117] ｎ／ｄ：決定せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0118] 処方物１０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、ｐＨ６．０、]
[0119] ]
[0120] ｎ／ｄ＝決定せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0121] 本発明による凍結乾燥ｈｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞薬物産物処方物の安定性データ
処方物 １０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、ｐＨ６．０、]
[0122] ]
[0123] ｎ／ｄ＝決定せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0124] 実施例２
液体、凍結乾燥、または凍結乾燥形態から再構成された液体のいずれかの以下の処方物を調製した：
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０２％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．０；
または
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ酢酸塩、および
２４０ｍＭトレハロース、
ｐＨ５．５；
または
２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、
２０ｍＭ酢酸塩、および
１４０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ５．５；
または
３０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、
０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、
２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、および
２００ｍＭトレハロース、
ｐＨ６．５。]
[0125] 非経口投与用の液体および凍結乾燥薬物産物処方物を以下のように調製した：]
[0126] 液体処方物の調製
ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の処方物を、生産バッファー（例えば、２４０ｍＭトレハロースおよび０．０２％（ｗ／ｖ）ポロクサマー１８８（商標）を含む２０ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ約６．０））中のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の溶液の均質化によって調製した。ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の処方物を、タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）により生産バッファー（例えば、２０ｍＭヒスチジンバッファー（ｐＨ約６．０））中の約１０〜４０ｍｇ／ｍｌ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の溶液をダイアフィルトレーションして、タンパク質濃度を標的タンパク質濃度より上に増加させ、そしてバッファーを交換することによって調製することもできる。ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の処方物を、バッファーでの希釈によってタンパク質濃度を所望の濃度に調整することによって調製することもできる。タンパク質の安定化のためおよび等張性調整のための賦形剤を溶解形態であるいは固体として加えることができる。界面活性剤を処方物にストック溶液として必要に応じて加えた。全ての処方物を０．２２μｍフィルターを通して無菌濾過し、そして無菌ガラスバイアル中に無菌的に小分けし、そしてゴム栓およびアルクリンプキャップで閉じた。これらの処方物を様々な温度で様々な時間間隔で貯蔵し、そして個々の段落に示す時点で分析のために取り出した。処方物を、１）ＵＶ分光光度法によって、２）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、３）可視および可視下粒子について、４）イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）によって、そして５）溶液の濁度によって分析した。]
[0127] 凍結乾燥処方物の調製
＜ＣＤ２０＞の溶液を、液体処方物について上記したように調製した。全ての処方物を０．２２μｍフィルターを通して無菌濾過し、そして無菌ガラスバイアル中に無菌的に小分けした。バイアルを凍結乾燥プロセスにおける使用のために適切なゴム栓である程度閉め、そして凍結乾燥器の乾燥チャンバーに移した。当技術分野において公知の任意の凍結乾燥方法が本発明の範囲内にあることが意図される。例えば、本研究のために使用される凍結乾燥プロセスは、処方物の室温から約５℃への冷却（事前冷却）およびそれに続く約１℃／分〜５℃／分のランプ速度での−４０℃での凍結（凍結Ｉ）を含んだ。第１の乾燥工程は、０．３〜０．５℃／分のランプ速度で−４０℃から−３０℃まで生じ、次いで、−３０℃で少なくとも５０時間、約７５〜８０ｍＴｏｒｒのチャンバー圧で保持することができる。第２の乾燥工程は、０．１〜０．３℃／分のランプ速度で−３０℃から２５℃まで生じ、そして、２５℃で少なくとも５時間、約５０〜８０ｍＴｏｒｒのチャンバー圧で保持することができる（適用された乾燥スケジュールを表１に与える）。記載した凍結乾燥プロセスを使用して乾燥させたＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞処方物は、カール・フィッシャー方法によって決定した場合約０．１〜１．０％の残存水含量を有することが見出された。凍結乾燥バイアルを様々な温度で様々な時間間隔で貯蔵した。凍結乾燥処方物を、１）ＵＶ分光光度法による分析、２）サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）による分析、３）イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）による分析、４）可視下および可視粒子の決定、および５）溶液の濁度による分析の前にそれぞれの容量の注射用水（ＷＦＩ）で再構成した。]
[0128] サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を、処方物中の可溶性高分子量種（凝集物）および低分子量加水分解産物を検出するために行った。方法は、ＵＶ検出器（検出波長２８０ｎｍ）およびＺｏｒｂａｘ ＧＦ−２５０カラム（９．４×２５０ｍｍ、Agilent）またはＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷＸＬ（７．８×３００ｍｍ）のいずれかを備えた適切なＨＰＬＣ機器を使用した；方法は２００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）、または２００ｍＭリン酸カリウム中の２５０ｍＭ塩化カリウム（ｐＨ７．０）のいずれかを移動相として使用した。]
[0129] イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を、処方物中のＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞の実効電荷を変化させる化学分解産物を検出するために行った。方法は、ＵＶ検出器（検出波長２２０および２８０ｎｍ）およびＤｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ−１０カラム（４ｍｍ×２５０ｍｍ）を備えた適切なＨＰＬＣ機器を使用した。Ｈ２Ｏ中の１０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）および１０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）＋０．７５Ｍ ＮａＣｌをそれぞれ移動相ＡおよびＢとして、１．０ｍＬ／分の流速で使用した。]
[0130] タンパク質濃度の決定のためのＵＶ分光光度法をＶａｒｉａｎ Ｃａｒｙ ＢｉｏまたはＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＵＶ分光光度計上で２８０ｎｍで行った。]
[0131] 濁度の決定のために、乳光をＨＡＣＨ ２１００ＡＮ濁度計を室温で使用してＦＴＵ（濁度単位）で測定した。]
[0132] 試料を、可視下粒子についてＨＩＡＣ Ｒｏｙｃｏ ＰｈａｒｍａＳｐｅｃ（ＨＲＬＤ−１５０）を使用することによって、そして可視粒子についてＳｅｉｄｅｎａｄｅｒ Ｖ９０−Ｔ視覚検査機器を使用することによって分析した。]
[0133] ]
[0134] 液体ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞薬物産物処方物の安定性データ
処方物 ２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、ｐＨ６．０、]
[0135] ]
[0136] 合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0137] 処方物２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、ｐＨ６．０、]
[0138] ]
[0139] ｎ／ａ：分析せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0140] 処方物２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、ｐＨ６．０、]
[0141] ]
[0142] ｎ／ａ：分析せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0143] 処方物２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ酢酸塩、２４０ｍＭトレハロース、０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、ｐＨ５．５、]
[0144] ]
[0145] ｎ／ａ：分析せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0146] 処方物２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ酢酸塩、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、ｐＨ５．５、]
[0147] ]
[0148] ｎ／ａ：分析せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0149] 処方物３０ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２００ｍＭトレハロース、０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、ｐＨ６．５、]
[0150] ]
[0151] 合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0152] 凍結乾燥ｈｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞薬物産物処方物の安定性データ
処方物 ２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）]
[0153] ]
[0154] 合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]
[0155] 処方物２５ｍｇ／ｍＬ ＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭ Ｌ−ヒスチジン、２４０ｍＭトレハロース、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート８０、ｐＨ６．０、]
[0156] ]
[0157] ｎ／ａ：分析せず
合格：可視粒子なし〜本質的になし、最大６０００粒子≧１０μｍ／容器、最大６００粒子≧２５μｍ／容器]

权利要求:

請求項1
以下を含む処方物：−約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、−場合により、約０．００１〜約１％ｗ／ｖの少なくとも１つの界面活性剤、および−約１〜約１００ｍＭのバッファー、−ｐＨ約４．５〜約７．０。
請求項2
以下を含む、請求項１記載の処方物：−約１〜約１５０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、−約０．００５〜約０．０５％ｗ／ｖの少なくとも１つの界面活性剤、および−約１〜約１００ｍＭのバッファー、−ｐＨ約４．５〜約７．０。
請求項3
以下を含む、請求項１または２記載の処方物：−約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、−２０ｍＭＬ−ヒスチジン、−２４０ｍＭトレハロース、および−０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、−ｐＨ約６。
請求項4
以下を含む、請求項１または２記載の処方物：−約１０〜約３０ｍｇ／ｍＬのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、−０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８、−２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および−２４０ｍＭトレハロース、−ｐＨ約６。
請求項5
液体形態、凍結乾燥形態または凍結乾燥形態から再構成された液体形態の、請求項１〜４のいずれか１項記載の処方物。
請求項6
静脈内（ｉ．ｖ．）または皮下（ｓ．ｃ．）または任意の他の非経口投与によって投与することができる、請求項１〜５のいずれか１項記載の処方物。
請求項7
約５ｍＭ〜約３５０ｍＭの量の１つ以上の等張剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の処方物。
請求項8
等張剤が、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カリウム、グルコースを含む糖、グリセリン、アミノ酸、およびその組み合わせからなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項記載の処方物。
請求項9
約２５ｍＭ〜約５００ｍＭの量の糖をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の処方物。
請求項10
糖が、トレハロース、サッカロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン（「メグルミン」）、ガラクトサミン、ノイラミン酸からなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか１項記載の処方物。
請求項11
薬学的に許容され得る：抗酸化剤、アスコルビン酸、グルタチオン、保存料、特にｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルブタノール、チオメルサール、塩化ベンザルコニウム、ポリエチレングリコール、特にＰＥＧ３０００、３３５０、４０００または６０００、アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、多価アルコール、グリセロール、エタノール、マンニトール、塩、酢酸塩、特に酢酸ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、トロメタミン、ＥＤＴＡ、特にＮａ−ＥＤＴＡからなる群より選択される１つ以上の成分をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の処方物。
請求項12
以下を含む、請求項１〜１１のいずれか１項記載の処方物：１５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、場合により、０．００１〜１％ｗ／ｖの界面活性剤、ｐＨ６．０；または１０ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０。
請求項13
凍結乾燥形態であり、そして以下を含む、請求項１〜１２のいずれか１項記載の処方物：１０ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート２０、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０。
請求項14
以下を含む、請求項１〜１１のいずれか１項記載の処方物：２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート８０、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸塩、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ５．５；または２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．１％ｗ／ｖポリソルベート８０、２０ｍＭ酢酸塩、および１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ５．５；または３０ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０１％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２００ｍＭトレハロース、ｐＨ６．５。
請求項15
液体形態であり、そして以下を含む、請求項１４記載の処方物：２５ｍｇ／ｍＬＨｕＭａｂ＜ＣＤ２０＞、０．０２％ｗ／ｖポロクサマー１８８（商標）、２０ｍＭＬ−ヒスチジン、および２４０ｍＭトレハロース、ｐＨ６．０。
請求項16
ＣＤ２０関連処置疾患のために有用な医薬の調製のための請求項１〜１５のいずれか１項記載の処方物の使用。
請求項17
疾患が、乳癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）および前立腺癌からなる群より選択される、請求項１６記載の使用。
請求項18
本明細書において上記する発明。